肉類中三聚氰胺的檢測方案
酶聯免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過均質及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進行免疫測定。先將三聚氰胺酶標記物,樣品萃取物及標準加入到已經包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應。在30分鐘的孵育過程中,樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭結合微孔中的三聚氰胺抗體,孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標記物。再用去離子水清洗結束后,每孔中加入清澈的底物溶液,結合的酶標記物將無色的底物轉化為藍色的物質。孵育30分鐘后停止此反應,根據各孔顏色深淺進行數據讀取。依據標準的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。
需要準備的材料:1、蒸餾水或去離子水:2可吸取50ul和100ul的移液器及吸頭。3、4000轉離心機4、吸水紙或相當的吸水材料:5、450nm的酶標儀:6、計時器 7、20mM PBS:需自行配制 8、清洗液:需自行配制
試劑配制:
1、20mM PBS:0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸餾水定容至1000ml
2、清洗液:0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml土溫20
樣品的前處理:肉類(稀釋倍數:5)
1、稱1g肉樣,加入5ml的10%甲醇/20Mmpbs,震蕩2min;
2、4000轉離心5min;
3、取2ml上清液加入2ml異辛烷:氯仿(2:3),混勻;
v4、4000轉離心5min,取上層150ul測定。[/b]
測定過程:
1、將所有試劑及樣品回升至室溫20-28℃,但不要放置超過24小時;
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