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- 產品庫存號:bfhb-035
食品安全檢測試劑盒(瘦肉精試劑盒)采用競爭酶標免疫法定量測定尿、肌肉,肝臟及飼料中的克倫特羅及其他β興奮劑。試劑盒中包括了96個試驗孔包括標準試驗及所有檢測用的試劑。如果進行定量分析,必須有微孔板酶標儀。
食品安全檢測試劑盒(瘦肉精試劑盒)概要
克侖特羅(clenbuterol,CLE)是一種腎上腺受體激動劑即神經興奮劑,在臨床上用于治療支氣管哮喘、慢性支氣管炎和肺氣腫等疾病,因此藥可以提高瘦肉率,減少脂肪沉積和促進動物生長,被一些畜牧養殖企業作為養殖促進劑非法使用。其殘留量可導致人體肌肉震顫、心悸、神經過敏、頭痛、目眩、惡心、嘔吐、發燒、戰栗等癥狀,對消費者的健康極有危害。現已被明令禁止用于養殖業。HPLC或GC-MS一直用作檢測β興奮劑的方法,但是其前處理步驟費用昂貴。酶聯免疫檢測試劑盒則可經濟、快速地檢測尿,肌肉,肝臟及飼料中的CLE。
食品安全檢測試劑盒(瘦肉精試劑盒)測定原理
測定的基礎是抗原抗體反應。微孔板包被有針對CLE的兔抗體。經過洗滌步驟后,加入CLE酶標記物,標準或樣品溶液。CLE與CLE-酶標記物競爭抗體,沒有連接的CLE-酶標記物在洗滌步驟中被除去。將酶反應底物(過氧化尿素)和顯色劑(四甲基聯苯胺)加入到孔中并且孵育。結合的酶標記物將無色的顯色劑轉化為藍色的產物。加入反應停止液后使顏色由藍轉變為黃色。在450nm處測量,吸收光強度與樣品中的CLE濃度成反比。
提供的試劑(2-8℃保存)切勿冷凍
每一個盒中的試劑足夠進行96個測量(包括標準分析孔),盒中的材料如下:
1×96孔板(12條×8孔)包被有兔IgG抗體
6×標準液,(2ml)為分別含0,0.1,0.3,0.9,2.7,8.1ppb的CLE水溶液
1×CLE過氧化物酶標記物濃縮溶液
1×酶反應底物(6ml);含有過氧化尿素
1×顯色劑(6ml);四甲基聯苯胺
1×反應停止液(7ml);1M硫酸
1×PBS(10ml),用于稀釋CLE-過氧化物酶標記物濃縮溶液
1×PBST濃縮液(40ml),加800ml蒸餾水稀釋,洗板用
樣品處理方法1
組織、肉樣(純精肉)、內臟樣品的處理方法:
1.稱2克勻漿過的樣品加入2mL溶液1(無色無味),攪拌或震蕩樣品,使之混合均勻。
2..加入6ml溶液2(淡黃色,具刺激性氣味),推薦用干凈的衛生筷或竹簽攪拌樣品5分鐘;或振蕩15分鐘,使其均勻分布于溶液中。
3.3000g離心10分鐘。
4.取3ml上清液于干凈平皿中,60℃恒溫箱蒸干(30分鐘左右);也可在試管中直接水浴加熱蒸干。
5.殘留物用1ml溶液2(無色無味)沖洗溶解。
6.3000g離心10分鐘。
7.取清亮中間部分50ul直接加樣,ELISA進行分析。
注:如果不慎將溶液弄到皮膚上,請立即用75%的醫用酒精棉花擦拭,并用清水沖洗。切勿飲用及濺入眼睛。
樣品處理方法2
1、稱2克勻漿過的樣品加入2mL溶液1(無色無味),攪拌或震蕩樣品,使之混合均勻。
2、加入4mL溶液2(淡黃色,具刺激性氣味),強烈振蕩,肉樣約2分鐘,組織約6分鐘。
3、3000g離心5分鐘。
4、取1ml上清液于干凈平皿中,70℃~80℃恒溫箱蒸干(約需5分鐘左右)。或用電吹風,只需3分鐘。
5、殘留物用0.5ml溶液3(無色無味)沖洗,將底部白色殘留物全部洗入溶液。
6、取洗脫液50ul作檢測用。
酶標免疫分析程序
1.測定之前注意事項
a)使用之前將所有試劑回升至室溫20-25℃
b)使用之后立即將所有試劑放回2-8℃
c)在使用中不要讓微孔干燥
d)在ELA分析中的重復性,很大程度上取決于洗板的一致性,仔細按照推薦的洗板順序操作是ELA測定程序中的要點
e)在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋子蓋住微孔板
2.酶標記物與微孔板條
a)CLE-酶標記物提供的CLE-酶標記物為濃縮液。由于稀釋的酶標記物穩定性不好,所以只稀釋實際需用量的酶標記物1:14稀釋(1μl酶標液加14μlPBS)。在吸取濃縮液之前,要仔細地振搖,剩余的仍放置2-8℃保存。
b)微孔板條取出需用數量的微孔板及框架,將不用的微孔板用膠帶封好,放進原袋中重新密封,4℃或-20℃保存,謹防受潮。
3.標準液提供的CLE標準液濃度為0,0.1,0.3,0.9,2.7,8.1ppb(ng/ml)
4.測定程序(室溫25℃條件下操作)
a)剪開鋁箔袋,將足夠標準和樣品所用數量的孔條插入微孔架,標準和樣品做兩個平行實驗,記錄下標準和樣品的位置。加入20μl的標準液或處理好的樣品到各自的微孔中。如果微孔板條一次實驗用不完,放回原鋁箔袋中封緊,最好再套一個塑料自封袋夾緊后4℃或-20℃保存,切忌受潮。
b)加入100μl稀釋的酶標記物到微孔底部,25℃孵育30分鐘(推薦使用恒溫箱)。
c)倒出孔中的液體,將微孔架倒置在吸水紙上拍打(每行拍打3次)以保證完全除去孔中的液體,用250μlPBST充入孔中,再次倒掉微孔中液體,再重復操作兩次。每次洗板應加入洗液后等2分鐘再倒掉。推薦使用洗瓶洗板,這樣可加快速度,避免板條間的孵育時間不一致而產生OD值的差異。
d)反應底物與顯色試劑以1:1混合后加入100μl到微孔中,充分混合并在25℃暗處孵育15分鐘。
e)加入50μl反應停止液到微孔中,混合好在450nm處測量吸光度值,必須在加入停止液后10分鐘內讀取光度值。
結果
所獲得的標準和樣品吸光度值的平均值除以第一個標準(0標準)的吸光度值再乘以100,因此0標準等于100%并且以百分比的形式給出吸光度值。
標準的吸光度值(或樣品)
-----------------------×100=%吸光度值
0標準的吸光度值
計算的標準值繪成為一個對應CLE濃度(ng/g,或ng/ml)的半對數坐標系統曲線圖,校正曲線在0.2-2ng/g(ppb)范圍內應當成為線性。相對應每一個樣品的濃度(ng/g,或ng/ml)可以從校正曲線上讀出。
靈敏度
克倫特羅測定試劑盒的平均檢測下限約為0.1ng/g(0.1ppb)。
食品安全檢測試劑盒(瘦肉精試劑盒)特異性
與克倫特羅類似物的交叉反應:
克倫特羅(Clenbuterol)100%
溴布特羅(brombuterol)110%
塞布特羅(cimbuterol)40%
馬噴特羅(mapenterol)17%
馬布特羅(mabuterol)16%
沙丁胺醇(salbutamol)9%
妥布特羅(tulobuterol)2%
特布他林(terbutalin)2%
萊克多巴胺<1%
異丙腎上腺素(Isoproterenol)<1%
腎上腺素(Adrenalin)<1%
去甲腎上腺素(Noradrenalin)<1%
食品安全檢測試劑盒(瘦肉精試劑盒)回收率:
回收率為90%±15%
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